Aus der Asche alter Konflikte steigen neue Schrecken auf. Die Umbrella Corporation und ihre tödlichen Viren wurden zerstört. Doch aus den Trümmern kommt eine neue und noch gefährlichere Bedrohung zum Vorschein. In den Jahren nach den Ereignissen in Raccoon City hat Chris Redfield die Geißel bio-organischer Waffen an allen Orten der Welt bekämpft. Mittlerweile ist er Mitglied der "Bio-terrorism Security Assessment Alliance" (BSAA), die ihn nach Afrika schickt, um einen biologischen Wirkstoff zu untersuchen, der die Bevölkerung in aggressive Bestien verwandelt hat. Zusammen mit seiner BSAA-Kollegin Sheva Alomar muss er die Wahrheit ans Licht bringen, die hinter den beunruhigenden Ereignissen steckt. Im revolutionären Kooperationsmodus können die Spieler die Schrecken in, Resident Evil 5 die Schrecken gemeinsam durchstehen.

Chris Redfield, die Hauptfigur aus dem Originalspiel Resident Evil sowie Resident Evil: Code Veronica, kehrt zurück und wird von der neuen, spielbaren Figur Sheva Alomar unterstützt, einer afrikanischen BSAA-Agentin, die die Epidemie untersuchen soll. Das neue Gameplay mit Schwerpunkt auf dem Kooperationsmodus revolutioniert das Spielerlebnis von Resident Evil, denn die Spieler können den Horror gemeinsam meistern. Resident Evil 5 unterstützt alle Formen des Koop-Gameplay, einschließlich des Online- und System Link-Modus und des Modus mit geteiltem Bildschirm.